Quant-iT™ RiboGreen® RNA 定量检测试剂盒在Modulus II微孔板型多功能检测仪上的应用

 Quant-iT™ RiboGreen® RNA定量检测试剂是一种超灵敏的核酸荧光染料.这种试剂可用于多种分子生物学实验中的RNA浓度快速检测,例如题外转录、northern杂交分析、RT-PCR、差异显示PCR、S1核酸分析、RNase保护分析以及用于文库的cDNA合成等。
通常我们使用260nm的光吸收来测定RNA浓度，但这种方法的灵敏度不高（4mg/ml RNA）,而且检测结果易受核苷酸、蛋白和RNA溶液中的盐离子影响。使用RiboGreen这类荧光染料来检测RNA可以避免上述问题。
Turner Biosystems公司的ModulusTM微孔板型多功能检测仪与RiboGreen® RNA检测试剂盒连用，可以实现在微孔板中快速准确的定量RNA。当RiboGreen染料处于溶液形式时，几乎没有荧光特性，当RiboGreen染料与RNA结合时，才表现出荧光特性。当RiboGreen-RNA复合物*大激发波长为500nm，*大发射波长为525nm。
使用ModulusTM微孔板型多功能检测仪的Blue荧光模块可以检测到50pg的RNA。RiboGreen® RNA检测试剂检测灵敏度要比EB检测法高出200倍，比260nm检测法高出1000倍。
使用两种浓度的RiboGreen试剂联合，可以检测到超过4个数量级的RNA（2.5ng/mL-1µg/mL）。高浓度的RiboGreen试剂可以检测到10ng/ml至1µg/mL的RNA，通过降低RiboGreen试剂的浓度可以检测到更低浓度的RNA（1 ng/mL – 50 ng/mL）